First molecular detection of Rickettsia sp. strain Atlantic rainforest in Amblyomma ovale ticks from Espírito Santo state, Brazil / Primeira detecção molecular da Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica em carrapatos Amblyomma ovale do estado do Espírito Santo, Brasil

Abstract Espírito Santo state (southeastern Brazil) is considered an endemic area for spotted fever group rickettsioses. In February 2017, we received in our laboratory seven unfed Amblyomma ovale adult ticks collected by a farmer from his clothes and body (not attached) during a working day in the rural area of Ibiraçu municipality, Espírito Santo state. By polymerase chain reaction (PCR) analyses, targeting gltA and ompA rickettsial genes, the DNA of Rickettsia was detected in 6/7 (85.7%) A. ovale. In all cases, DNA sequencing of PCR products revealed that consensus sequences of both genes were 100% identical to gltA and ompA corresponding sequences of Rickettsia sp. strain Atlantic rainforest retrieved from GenBank. This study reports the first molecular detection of Rickettsia sp. strain Atlantic rainforest in A. ovale ticks from Espírito Santo state. Our findings indicate a new Brazilian state in the southeast region at risk of human infection with this tick-borne emerging rickettsial agent.

Resumo O estado do Espírito Santo (Sudeste do Brasil) é considerado área endêmica para riquetsioses do Grupo Febre Maculosa. Em fevereiro de 2017, recebemos em nosso laboratório sete carrapatos adultos Amblyomma ovale não ingurgitados, coletados por um fazendeiro nas suas roupas e corpo (não fixadas) durante um dia de trabalho, em área rural do municipio de Ibiraçu, estado do Espírito Santo. Por meio de reação em cadeia da polimerase (PCR), amplificando os genes riquetsiais gltA e ompA , foi detectado ADN de Rickettsia em 6/7 (85,7%) dos A. ovale . O sequenciamento dos produtos de PCR indicou que as sequências consenso de ambos genes foram 100% idênticos às sequências correspondentes dos genes gltA e ompA da Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica recuperadas do GenBank. Este estudo relata a primeira detecção molecular da Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica em carrapatos A. ovale do estado do Espírito Santo. Nossos resultados apontam um novo estado brasileiro da região Sudeste com risco de infecção humana por este agente rickettsial emergente transmitido por carrapatos.

Amblyomma triste en simpatría con Amblyomma tigrinum (Acari: Ixodidae) en la provincia de Santa Fe, Argentina / Amblyomma triste and Amblyomma tigrinum (Acari: Ixodidae) in sympatry in Santa Fe Province, Argentina

El objetivo del presente trabajo es comunicar el hallazgo de Amblyomma triste por primera vez en la provincia de Santa Fe, Argentina, y sumar una nueva localidad para Amblyomma tigrinum en la misma provincia. Ambas especies de garrapatas son reconocidos vectores de Rickettsia parkeri, agente etiológico de la fiebre manchada. Los especímenes fueron colectados durante el mes de agosto de 2014 y diciembre de 2015 a partir de turistas en la Fundación Federico Wildermuth (31° 59'S, 61° 24'O), departamento de San Martín, provincia de Santa Fe. Se colectaron 5 garrapatas adultas que fueron identificadas morfológicamente como A. tigrinum (3 hembras y 1 macho) y A. triste (1 hembra). El presente hallazgo de A. triste y A. tigrinum representa el primero en incluir a ambas especies del complejo Amblyomma maculatum en una misma localidad y permite alertar sobre la presencia de vectores de R. parkeri en la zona. Nuevos estudios que incluyan el muestreo de un mayor número de garrapatas y la detección de R. parkeri permitirán dilucidar más aspectos sobre la situación de esta rickettsia en Santa Fe.

The aim of this communication is to report, for the first time, the occurrence of Amblyomma triste in Santa Fe province, Argentina, and to add a new isolation place for Amblyomma tigrinum. Both species of ticks are vectors of Rickettsia parkeri, a spotted fever group rickettsia. Ticks were recovered from tourists in August 2014 and December 2015 at the Federico Wildermuth Foundation (31° 59'S, 61° 24'O), San Martin Department, Santa Fe province. Five adult ticks were morphologically identified as A. tigrinum (3 females and 1 male) and A. triste (1 female). This is the first finding including both Amblyomma maculatum group species, A. triste and A. tigrinum, together in the same locality in Argentina. This finding suggests that this site might have favorable features for the development of both species of R. parkeri vector. Further studies including sampling of a larger number of ticks and detection of R. parkeri DNA are needed to better document the epidemiology of this rickettsia in Santa Fe.

Guías Latinoamericanas de la RIICER para el diagnóstico de las rickettsiosis transmitidas por garrapatas / Latinamerican guidelines of RIICER for diagnosis of tick-borne rickettsioses

Tick-borne rickettsioses are worldwide infectious diseases that are considered emerging and re-emerging. Until recently the only tick-borne rickettsiosis present in Latin America was Rickettsia rickettsii infection, but to date, with the incorporation of new tools as PCR and sequencing and the quick cellular close tube cultures (Shell-vial), new species has been involved as human pathogens. In these guidelines, we offer an update of the microbiological assays for diagnosing rickettsioses. Besides we have included a section in which the most important hard ticks involved in human rickettsioses in Latinoamerica are detailed.

Las rickettsiosis transmitidas por garrapatas son afecciones de distribución mundial, que por diferentes motivos se pueden considerar emergentes y reemergentes. Hasta hace escasos años la única rickettsiosis transmitida por garrapatas en Latinoamérica era la infección por Rickettsia rickettsii, pero en la actualidad y fundamentalmente, gracias a la incorporación de nuevas herramientas para el diagnóstico microbiológico como la reacción en cadena de la polimerasa y secuenciación o el cultivo celular rápido en tubo cerrado, se han descrito e involucrado otras especies de Rickettsia en la producción de patología humana. En estas guías se detallan y describen las diferentes técnicas utilizadas para el diagnóstico microbiológico de las rickettsiosis. Además, se incluye una sección en la que se detallan las especies más importantes de garrapatas duras relacionadas con las rickettsiosis en Latinoamérica, con claves para su clasificación taxonómica.

Caso probable de fiebre manchada ( Rickettsia felis) transmitida por pulgas / Probable case of flea-borne spotted fever ( Rickettsia felis )

Rickettsia felis es el agente etiológico de la fiebre manchada transmitida por pulgas, cuyo principal vector y reservorio es Ctenocephalides felis . Típicamente, la enfermedad se presenta como fiebre aguda asociada a cefalea, astenia, exantema máculo-papular generalizado y, en algunos casos, con escara de inoculación. En los últimos años, R. felis ha venido adquiriendo un papel importante en la etiología del síndrome febril agudo, calificándola como una enfermedad emergente y subdiagnosticada. La inmunofluorescencia indirecta es actualmente el método diagnóstico de referencia. Sin embargo, esta técnica presenta limitaciones relacionadas con la reacción cruzada que existe entre las diferentes especies del género Rickettsia . En el presente reporte se describe el caso de un paciente de 16 años con síndrome febril agudo secundario a infección probable por R. felis .

Rickettsia felis is the etiologic agent of flea-borne spotted fever, with Ctenocephalides felis as its main vector and reservoir. Typically, the disease presents as acute fever associated with headache, asthenia, generalized maculo-papular rash, and in some cases, an inoculation eschar. In recent years, R. felis has acquired an important role in the etiology of the acute febrile syndrome; it is indeed an emerging infectious disease, albeit underdiagnosed. Indirect immunofluorescence assay (IFA) is currently the reference diagnostic method. However, this technique has limitations related to the cross reactivity among different species of rickettsiae. Herein, we describe a case of a 16 year-old patient with an acute febrile syndrome secondary to probable infection with R. felis.

Ecoepidemiología de la infección por rickettsias en roedores, ectoparásitos y humanos en el noroeste de Antioquia, Colombia / Ecoepidemiology of rickettsial infection in rodents, ectoparasites and humans in northeastern Antioquia, Colombia

Introducción. Las rickettsias son bacterias patógenas usualmente transmitidas por ectoparásitos, como garrapatas, piojos o pulgas. En la última década se presentaron tres brotes de rickettsiosis con casos fatales en la región noroccidental de Antioquia y en un municipio limítrofe de Córdoba. Objetivo. Describir la ecología y la epidemiología de las infecciones por Rickettsia spp. en el Urabá antioqueño. Materiales y métodos. Se obtuvieron muestras de 354 roedores y se recolectaron 839 ectoparásitos de estos en los municipios de Apartadó, Turbo y Necoclí. Asimismo, se obtuvieron 220 sueros humanos. Estas muestras fueron estudiadas por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) e inmunofluorescencia indirecta (IFI) para la detección de infección por rickettsias. Resultados. Por IFI se detectaron anticuerpos antirickettsias en 130 (43 %) de los roedores y en 53 (24 %) de los sueros humanos estudiados. Además, se amplificaron secuencias del gen gltA específicas del género Rickettsia en 23 (6,8 %) muestras de hígado de roedores, las cuales mostraron una similitud del 98,7 % con R. prowazekii . Una secuencia de gltA obtenida de larvas de garrapatas del género Amblyomma sp., tuvo una identidad mayor de 99 % con las secuencias de R. tamurae . Conclusión. Estos resultados demuestran la circulación de rickettsias en roedores, ectoparásitos y humanos en los municipios estudiados.

Introduction: Rickettsia spp. are tick, flea or lice-borne pathogenic bacterium, usually carried by rodents. In the last decade three outbreaks of rickettsial disease including fatalities, occurred in the provinces of Antioquia and Córdoba in northwestern Colombia. Objective: The purpose of this study was to perform an ecological and epidemiological description of the Rickettsia spp infection in the recently affected region of Colombia. Materials and methods: Samples were obtained from 354 rodents and their parasites captured in the municipalities of Apartadó, Turbo and Necoclí. Likewise, 220 human sera were also collected, for detection of infection by Rickettsia spp. Results: Indirect immunofluorescence assay (IFA) revealed that 130 (43%) of the rodents and 53 (24%) of the humans produced antibodies to Rickettsia spp. Additionally, rickettsial DNA was amplified by PCR from 23 (6.8%) rodent liver samples using primers directed to the genus specific gltA gene. While gltA sequences from rodent samples exhibited a 98.7% similitude with R . prowazekii, a sequence amplified from larvae of Amblyomma sp exhibited identities of >99% similarity with R. tamurae . Conclusion: These results demonstrate the presence of rickettsia in rodents, ectoparasites and humans throughout the municipalities studied.

Rickettsiosis transmitidas por garrapatas en las Américas: avances clínicos y epidemiológicos, y retos en el diagnóstico / Tick-borne rickettsioses in the Americas: clinical and epidemiological advances, and diagnostic challenges

Las rickettsiosis son entidades clínicas de tipo zoonótico, causadas por bacterias intracelulares estrictas de los géneros Rickettsia y Orientia, pertenecientes a la familia Rickettsiaceae. Su ecología está determinada por factores ambientales y la presencia de vectores específicos que condicionan el establecimiento y la epidemiología en diferentes regiones del mundo. En las Américas, durante el siglo XX, únicamente eran reconocidas tres de estas enfermedades: la fiebre manchada de las Montañas Rocosas, el tifus epidémico y el tifus endémico, Sin embargo, a partir del año 2000 se han descrito mas de 10 especies diferentes previamente desconocidas en este continente, tanto en artrópodos como en casos clínicos, hecho que permite clasificarlas como entidades clínicas emergentes y reemergentes. Dadas las manifestaciones clínicas de las enfermedades causadas por rickettsias, siendo la gran mayoría inespecíficas y, por lo mismo, compartidas con otras enfermedades infecciosas, especialmente virales y bacterianas, han sido enmarcadas entre los diagnósticos diferenciales del síndrome febril agudo, tanto en áreas urbanas como tropicales. En la actualidad, se cuenta con métodos diagnósticos directos e indirectos, que son útiles en la identificación del agente infeccioso, en este caso, causante de rickettsiosis.

Rickettsioses are a group of zoonotic diseases caused by strict intracellular bacteria of the genus Rickettsia and Orientia which belong to the Rickettsiaceae family. Their ecology is influenced by environmental factors and the presence of specific vectors that determine the establishment and epidemiology in different world regions. In America, during the 20 th century, only three of these diseases were recognized: Rocky Mountain spotted fever, epidemic typhus and endemic typhus. However, since 2000, more than 10 different species that had previously been unknown in this continent have been described, both in arthropods and in clinical cases, fact that classifies them as emerging and re-emerging diseases. Given the clinical manifestations of the diseases caused by rickettsias, being the majority unspecific and, therefore, shared with other infectious diseases, especially viral and bacterial, they have been framed within the differential diagnoses of acute febrile syndrome in urban and tropical areas. Nowadays, there are direct and indirect diagnostic methods, which are useful in the definition of the infectious agent, in this case, the cause of rickettsioses.

Molecular identification of Rickettsia parkeri infecting Amblyomma triste ticks in an area of Argentina where cases of rickettsiosis were diagnosed

Specimens of the hard tick Amblyomma triste were found infected with Rickettsia parkeri in an area of Argentina (General Lavalle, Buenos Aires Province) where cases of human illness attributed to this microorganism have been reported. Molecular detection of R. parkeri was based on polymerase chain reactions that amplify a ca. 400-bp fragment of the 23S-5S intergenic spacer and a ca. 500-bp fragment of the gene encoding a 190-kDa outer membrane protein. Three (6.97%) of 43 A. triste ticks were determined to be positive for R. parkeri. These results provide strong evidence that A. triste is the vector of R. parkeri in the study area. The findings of this work have epidemiological relevance because human parasitism by A. triste ticks has been frequently recorded in some riparian areas of Argentina and Uruguay and new cases of R. parkeri rickettsiosis might arise in the South American localities where humans are exposed to the bites of this tick species.

Rickettsia parkeri: a Rickettsial pathogen transmitted by ticks in endemic areas for spotted fever rickettsiosis in southern Uruguay / Rickettsia parkeri: patógeno rickettsial transmitido por garrapatas en áreas endémicas de rickettsiosis por fiebre manchada en el sur de Uruguay

At first Rickettsia conorii was implicated as the causative agent of spotted fever in Uruguay diagnosed by serological assays. Later Rickettsia parkeri was detected in human-biting Amblyomma triste ticks using molecular tests. The natural vector of R. conorii, Rhipicephalus sanguineus, has not been studied for the presence of rickettsial organisms in Uruguay. To address this question, 180 R. sanguineus from dogs and 245 A. triste from vegetation (flagging) collected in three endemic localities were screened for spotted fever group (SFG) rickettsiosis in southern Uruguay. Tick extracted DNA pools were subjected to PCR using primers which amplify a fragment of the rickettsial gltA gene. Positive tick DNA pools with these primers were subjected to a second PCR round with primers targeting a fragment of the ompA gene, which is only present in SFG rickettsiae. No rickettsial DNA was detected in R. sanguineus. However, DNA pools of A. triste were found to be positive for a rickettsial organism in two of the three localities, with prevalences of 11.8% to 37.5% positive pools. DNA sequences generated from these PCR-positive ticks corresponded to R. parkeri. These findings, joint with the aggressiveness shown by A. triste towards humans, support previous data on the involvement of A. triste as vector of human infections caused by R. parkeri in Uruguay.

Inicialmente, Rickettsia conorii fue señalada como el agente causal de la fiebre manchada en Uruguay, diagnosticada mediante pruebas serológicas. Posteriormente, Rickettsia parkeri fue detectada mediante técnicas moleculares en garrapatas Amblyomma triste colectadas sobre humanos. El vector natural de R. conorii, Rhipicephalus sanguineus, no ha sido estudiado en cuanto a rickettsias en Uruguay. Para abordar este tema, 180 R. sanguineus fueron colectados sobre perros y 245 A. triste sobre vegetación en tres localidades consideradas endémicas para fiebres manchadas en el sur de Uruguay. El ADN de las garrapatas fue extraído en pools y sometido a una primera PCR utilizando cebadores que amplifican un fragmento del gen gltA, presente en prácticamente todas las especies de Rickettsia. Las muestras positivas fueron sometidas a una segunda PCR con cebadores que amplifican un fragmento del gen ompA, presente sólo en rickettsias del grupo de las fiebres manchadas (GFM). No se detectó ADN rickettsial en R. sanguineus. Sin embargo, muestras de A. triste fueron positivas a rickettsiales en dos de las tres localidades estudiadas, con prevalencias de pools positivos del 11.8 y 37.5% respectivamente. La secuenciación del ADN evidenció la presencia de R. parkeri. Basados en estos resultados junto a los anteriores y la agresividad de A. triste hacia los humanos, se concluye que esta garrapata es vector de rickettsiosis humana por R. parkeri en Uruguay.

Febre maculosa brasileira: avaliação dos dados da vigilância e descrição do perfil clínico e epidemiológico no Estado de São Paulo, 2003 a 2007 / Brazilian spotted fever: evaluation of surveillance data and description of clinical and epidemiological characteristics in São Paulo State, 2003 to 2007

Introdução: A febre maculosa brasileira (FMB) é uma doença infecciosa febril aguda, de elevada letalidade, causada pela bactéria Rickettsia rickettsii, transmitida por carrapato do gênero Amblyomma. Desde a implantação da notificação obrigatória da doença em 2001, não foi avaliada a qualidade dos dados da vigilância, nem o impacto da implantação do sistema Sinan/Net e digitação completa da ficha de investigação em 2007. Também são poucos os estudos sobre a sua epidemiologia. Objetivo: Avaliar a qualidade das informações e levantar alguns atributos do sistema de vigilância epidemiológica da FMB e descrever os casos confirmados/compatíveis notificados ao Centro de Vigilância Epidemiológica do Estado de São Paulo (CVE/SP), entre 2003 e 2007. Métodos: Estudo descritivo de série de casos, por meio da análise dos casos notificados em três bases de dados: Sinan/W, Casos/CVE e Sinan/Net. Foram analisados dois intervalos: 2003-2006, e 2007. Avaliados critérios de qualidade dos dados (duplicidade, completude e consistência), valor preditivo positivo e oportunidade do sistema de vigilância. Os casos confirmados/compatíveis foram descritos segundo as variáveis disponíveis em todo o período. Resultados: A duplicidade da notificação ocorreu nos dois períodos, o VPP diminuiu em todo o período, em decorrência do aumento das notificações, mas piora na confirmação/descarte dos casos (2007 apresentou 30 por cento com classificação final ignorada). A completude das variáveis foi melhor em 2007, especialmente dos casos confirmados/compatíveis, quando comparados com os casos descartados/ignorados. Os casos confirmados/compatíveis do Sina/Net (2007) apresentaram uma melhora global na completude quando comparados com os casos confirmados/compatíveis do Casos/CVE (2003-2006). As inconsistências foram pouco freqüentes, porém o sistema mantinha-se inoportuno no encerramento dos casos. Em 2007 observou-se uma melhora na cobertura de exames de sorologia, mas uma piora na realização de i...

Molecular identification of Rickettsia felis in ticks and fleas from an endemic area for Brazilian Spotted Fever

Rickettsioses are arthropod-borne diseases caused by parasites from the Order Rickettsiales. The most prevalent rickettsial disease in Brazil is Brazilian Spotted Fever (BSF). This work intends the molecular detection of those agents in ectoparasites from an endemic area of BSF in the state of Espírito Santo. A total of 502 ectoparasites, among them Amblyomma cajennense, Amblyomma dubitatum (A. cooperi), Riphicephalus sanguineus, Anocentor nitens and Ctenocephalides felis, was collected from domestic animals and the environment and separated in 152 lots according to the origin. Rickettsia sp. was detected in pools of all collected species by amplification of 17kDa protein-encoding gene fragments. The products of PCR amplification of three samples were sequenced, and Rickettsia felis was identified in R. sanguineus and C. felis. These results confirm the presence of Rickettsia felis in areas previously known as endemic for BSF, disease caused by Rickettsia rickettsii. Moreover, they show the needing of further studies for deeper knowledge of R. felis-spotted fever epidemiology and differentiation of these diseases in Brazil.

Deteccão de riquétsias em carrapatos do gênero Amblyomma (Acari: Ixodidae) coletados em parque urbano do município de Campinas, SP / Rickettsiae detection in Amblyomma ticks (Acari: Ixodidae) collected in the urban area of Campinas city, SP

O Município de Campinas situa-se em região endêmica para febre maculosa brasileira do Estado de São Paulo, onde vários casos desta doenca vem ocorrendo. Capivaras têm sido associadas ao ciclo dessa riquetsiose por apresentarem sorologia positiva e serem hospedeiras de carrapatos Amblyomma spp principais vetores da doenca. Carrapatos foram coletados no parque urbano do Lago do Café, Campinas, SP, local associado a casos humanos suspeitos de febre maculosa brasileira, sobre a vegetacão e das capivaras ali presentes, e pesquisados quanto à presenca de riquétsias pela reacão em cadeia da polimerase e pelo teste de hemolinfa. Adultos de Amblyomma cajennense e Amblyomma cooperi albergavam Rickettsia bellii, não patogênica, identificada pela análise das seqüências de nucleotídeos do gene gltA, porém, não foram constatadas riquétsias do Grupo da Febre Maculosa. Estes resultados associados à ausência de um isolado de riquétsias do Grupo da Febre Maculosa de capivaras indicam que seu papel, enquanto reservatório, necessita de maior investigacão.

Antibodies against rickettsia in humans and potential vector ticks from dhofar, Oman

Objective - To determine the extent of rickettsial infections prevalence of potential vector ticks in the rural population of Dhofar, Oman. Method - Human sera [n = 347] were obtained from six rural localities [school children, farmers, outpatients] in Dhofar, Sultanate of Oman. Sera were tested by immunofluorescence for the presence of antibodies reacting with Rickettsia conorii antigen. Results - More than half the samples [59%] gave positive reactions [titres of at least 1:64]. Ticks [n=707] were collected from cattle, camels and goats [n=102] and included Amblyomma variegatum, Hyalomma a. anatolicum, H. dromedarii, H. rufipes and Rhipicephalus spp., all of which can potentially transmit rickettsiae to humans. Conclusion - The results suggest that rickettsial infections are common among the rural population of Dhofar